※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。
序文
ISO (国際標準化機構) は、各国の標準化団体 (ISO メンバー団体) の世界的な連合です。国際規格の作成作業は、通常、ISO 技術委員会を通じて行われます。技術委員会が設立された主題に関心のある各会員団体は、その委員会に代表される権利を有します。 ISOと連携して、政府および非政府の国際機関もこの作業に参加しています。 ISO は、電気技術の標準化に関するすべての問題について、国際電気標準会議 (IEC) と緊密に協力しています。
国際規格は、ISO/IEC 指令のPart 2 部で規定されている規則に従って起草されます。
技術委員会の主な任務は、国際規格を準備することです。技術委員会によって採択されたドラフト国際規格は、投票のためにメンバー団体に回覧されます。国際規格として発行するには、投票するメンバー団体の少なくとも 75% による承認が必要です。
このドキュメントの一部の要素が特許権の対象となる可能性があることに注意してください。 ISO は、そのような特許権の一部または全部を特定する責任を負わないものとします。
ISO 21427-2 は、技術委員会 ISO/TC 147, 水質、小委員会 SC 5, 生物学的方法によって作成されました。
ISO 21427 は、次の部分で構成され、一般的なタイトルは「水質 - 微小核の誘導の測定による遺伝毒性の評価」です。
- 第1部：両生類幼虫を用いた遺伝毒性評価
- Part 2: 細胞株 V79 を使用した混合集団法
警告 — ISO 21427 のこの部分を使用する人は、通常の実験室の慣行に精通している必要があります。この規格は、その使用に関連する安全上の問題があったとしても、そのすべてに対処することを意図していません。適切な安全衛生慣行を確立し、国内の規制条件を確実に遵守することは、ユーザーの責任です。
重要 — ISO 21427 のこの部分に従って実施される試験は、適切に訓練されたスタッフによって実施されることが絶対に不可欠です。
1 スコープ
ISO 21427 のこのパートでは、チャイニーズハムスターの V79 細胞の染色体または有糸分裂装置に水溶性物質によって誘発される損傷を検出する哺乳動物の in vitro試験を使用して、水および廃水の遺伝毒性を決定する方法を規定しています。
小核試験では、細胞遺伝学的損傷を引き起こす物質を特定することができます。これにより、遅滞染色体断片および/または染色体全体を含む小核が形成されます。
このアッセイは、代謝活性化の有無にかかわらずインキュベーション後の微小核細胞の頻度の増加に基づいています。
2 参考文献
本書の適用には、以下の参考文献が不可欠です。日付のある参考文献については、引用された版のみが適用されます。日付のない参照については、参照文書の最新版 (修正を含む) が適用されます。
- ISO 5667-16, 水質 — サンプリング — Part 16: サンプルのバイオテストに関するガイダンス
3 用語と定義
このドキュメントでは、次の用語と定義が適用されます。
3.1
細胞株
培養で増殖した細胞の異なるファミリーは、単一のクローンに由来します
3.2
補因子溶液
S9 画分の酵素の活性に必要な化学物質 (NADP, グルコース-6-リン酸、無機塩など) の水溶液
3.3
希釈度D
水または廃水と希釈水との混合物の希釈係数の分母（分子1を使用）を整数として
注記原水または廃水の場合，この係数は定義により 1:1 である。対応する最小の D 値は 1 です。
3.4
D値
ISO 21427 のこの部分の条件下で、培養あたりの小核数の増加が検出されない D の最小値。
注記 1つ以上の D 値の場合 (最大 2 つが可能である。9.2 を参照)、最も高い D 値が決定的である。
3.5
核型
サイズ、形状、染色体数など、細胞の核の特徴
3.6
小核
染色体の無動原体断片および/または染色体全体からなる小さな粒子。細胞分裂の後期段階で後ろにあり、終期の後、細胞質内に単一または複数の小核を形成する
3.7
有糸分裂指数
特定の観察時間における分裂中の細胞集団の細胞のパーセンテージ
3.8
めっき効率
単一細胞に由来するコロニー数の尺度
3.9
増殖指数
細胞が培養内で分裂する速度
3.10
増殖率
クローンの 1, 2, 4, および 8 細胞段階を考慮した式によって計算された、細胞が複製する速度
3.11
S9画分
酵素誘導のための適切な物質または物質の組み合わせで前処理された雄ラット (200 g から 300 g) の肝臓から得られた、0.15 mol/l KCl 中の組織ホモジネートの 9,000 g の上清
3.12
S9ミックス
S9 画分と補因子溶液の混合物
3.13
ストックカルチャー
V79細胞の特徴を保存するための凍結培養
3.14
生存指数
毒性の指標として使用されるすべての細胞と比較した生存細胞の割合
3.15
試験培養
研究に使用される細胞の培養
参考文献
| [1] | ISO 5667-1, 水質 - サンプリング - Part 1: サンプリング プログラムおよびサンプリング技術の設計に関するガイダンス |
| [2] | ISO 5667-2, 水質 — サンプリング — Part 2: サンプリング技術に関するガイダンス |
| [3] | ISO 5667-3, 水質 — サンプリング — Part 3: 水サンプルの保存と取り扱いに関するガイダンス |
| [4] | ISO 5667-10, 水質 — サンプリング — Part 10: 廃水のサンプリングに関するガイダンス |
| [5] | ISO 5667-14, 水質 - サンプリング - Part 14: 環境水のサンプリングと取り扱いの品質保証に関するガイダンス |
| [6] | ISO 13829, 水質 — ウム試験を使用した水および廃水の遺伝毒性の測定 |
| [7] | ISO 16240, 水質 — 水および廃水の遺伝毒性の測定 — サルモネラ/ミクロソーム試験 (エイムズ試験) |
| [8] | ISO/TS 20281, 水質 - 生態毒性データの統計的解釈に関するガイダンス |
| [9] | AmesBN McCann J および YamasakiEサルモネラ/哺乳類ミクロソーム変異原性試験による発がん物質および変異原の検出c Mutation Res ., 31 , 1975, pp. 347-364 |
| [10] | チャイニーズハムスター卵巣細胞における染色体異常誘導に関連する細胞毒性の定量的評価。 Mutation Res ., 265 , 1992, pp. 45-60 |
| [11] | Bradley MO, B huyan B, Francis MC, Langenbach R, Peterson A, およびHuberman E. V79チャイニーズハムスター細胞における化学物質による突然変異誘発: 文献のレビューと分析。 Gene Tox プログラムのレポート。 Mutation Res. , 87 , 1981, pp. 81-142 |
| [12] | Demarini , DM, Dallas , MM およびLewtas , J. マイクロ懸濁液アッセイにおける緩衝液の細胞毒性および変異原性への影響。テル。カルク。 Mut ., 9 , 1989, pp. 287-295 |
| [13] | K alweit 、S.、U tesch 、D.、 von derHude 、U.およびM adle 、S. V79細胞における化学的に誘導された小核形成 - 3つの異なる試験アプローチの比較。 Mutation Res ., 439 , 1999, pp. 183-190 |
| [14] | Miller , b.、 Pujadas , E. およびGocke , E. チャイニーズハムスター細胞を使用した in vitroでの小核試験の評価: in vivo小核試験で弱陽性の 4 つの化学物質の結果。環境Mol. Mutagen ., 26 , 1995, pp. 240-247 |
| [15] | Richardson, C.、 Williams 、DA, Allen 、JA, Amphlett 、G.、 Chanter 、DOおよびPhillips, B. in vitro細胞遺伝学的アッセイからのデータの分析。 In: Statistical Evaluation of Mutagenicity Test Data (ed. DJ Kirkland), Cambridge University Press, Cambridge, 1989, pp. 141-154 |
| [16] | Scott, D., Galloway , SM, Marshall , RR , Ishidate, JR. M.、 Brusick 、D.、 Ashby 、J. およびMyhr 、BC 極端な培養条件下での遺伝毒性。 ICPEMC タスク グループからのレポート 9. Mutation Res ., 257 , 1991, pp. 147-204 |
| [17] | S peit , G.、H aupter , S. およびVogel , W. 姉妹染色分体分化 (SCD) を伴う有糸分裂の特徴付け、および非同期的に増殖する細胞における増殖動態および姉妹染色分体交換の分析への影響。ハム。遺伝学、 71 、1985年、pp.358-360 |
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 21427-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biological methods.
ISO 21427 consists of the following parts, under the general title Water quality — Evaluation of genotoxicity by measurement of the induction of micronuclei:
- Part 1: Evaluation of genotoxicity using amphibian larvae
- Part 2: Mixed population method using the cell line V79
WARNING — Persons using this part of ISO 21427 should be familiar with normal laboratory practice. This standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted according to this part of ISO 21427 be carried out by suitably trained staff.
1 Scope
This part of ISO 21427 specifies a method for the determination of genotoxicity of water and waste water using a mammalian in vitro test which detects damage, induced by water-soluble substances, to the chromosomes or the mitotic apparatus of V79 cells from the Chinese hamster.
The micronucleus test allows the identification of substances that cause cytogenetic damage which results in the formation of micronuclei containing lagging chromosome fragments and/or whole chromosomes.
The assay is based on the increase in the frequency of micronucleated cells after incubation with and without metabolic activation.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
- ISO 5667-16, Water quality — Sampling — Part 16: Guidance on biotesting of samples
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply:
3.1
cell lines
distinct families of cells grown in culture originated from a single clone
3.2
cofactor solution
aqueous solution of chemicals (e.g. NADP, Glucose-6-phosphate and inorganic salts) needed for the activity of the enzymes in the S9 fraction
3.3
dilution level D
denominator of the dilution coefficient (using the numerator 1) of a mixture of water or waste water with dilution water as integral number
Note 1 to entry: For undiluted water or waste water, this coefficient is per definition 1:1. The corresponding smallest possible D value is 1.
3.4
D value
smallest value of D at which, under the conditions of this part of ISO 21427, no increase in the number of micronuclei per culture is detected
Note 1 to entry: In the case of more than one D value (at maximum two are possible, see 9.2), the highest D value is decisive.
3.5
karyotype
characteristic of the nucleus of a cell, including its size, form and chromosome number
3.6
micronuclei
small particles consisting of acentric fragments of chromosomes and/or entire chromosomes which lag behind at anaphase stage of cell division and form, after telophase, single or multiple micronuclei in the cytoplasm
3.7
mitotic index
percentage of cells of a cell population under division at a particular time of observation
3.8
plating efficiency
measure of the number of colonies originated from single cells
3.9
proliferation index
rate at which cells are dividing within the culture
3.10
proliferation rate
rate with which cells replicate, calculated by a formula which takes into account 1, 2, 4 and 8 cell stages of clones
3.11
S9 fraction
9 000 g supernatant of a tissue homogenate in 0,15 mol/l KCl, obtained from livers of male rats (200 g to 300 g) pretreated with an appropriate substance or substance combination for enzyme induction
3.12
S9 mix
mixture of the S9 fraction and the cofactor solution
3.13
stock culture
frozen culture for the preservation of the characteristics of V79 cells
3.14
survival index
percentage of surviving cells compared to all cells, used as index of toxicity
3.15
test culture
culture of cells used for the study
Bibliography
| [1] | ISO 5667-1, Water quality — Sampling — Part 1: Guidance on the design of sampling programmes and sampling techniques |
| [2] | ISO 5667-2, Water quality — Sampling — Part 2: Guidance on sampling techniques |
| [3] | ISO 5667-3, Water quality — Sampling — Part 3: Guidance on the preservation and handling of water samples |
| [4] | ISO 5667-10, Water quality — Sampling — Part 10: Guidance on sampling of waste waters |
| [5] | ISO 5667-14, Water quality — Sampling — Part 14: Guidance on quality assurance of environmental water sampling and handling |
| [6] | ISO 13829, Water quality — Determination of the genotoxicity of water and waste water using the umu-test |
| [7] | ISO 16240, Water quality — Determination of the genotoxicity of water and waste water — Salmonella/microsome test (Ames test) |
| [8] | ISO/TS 20281, Water quality — Guidance on statistical interpretation of ecotoxicity data |
| [9] | Ames, B.N., McCann, J. and Yamasaki, E. Methods for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonella/mammalian-microsome mutagenicity test. Mutation Res., 31 , 1975, pp. 347-364 |
| [10] | Armstrong, M.J., Bean, C.L. and Galloway, S.M. A quantitative assessment of the cytotoxicity associated with chromosomal aberration induction in Chinese hamster ovary cells. Mutation Res., 265 , 1992, pp. 45-60 |
| [11] | Bradley, M.O., Bhuyan, B., Francis, M.C., Langenbach, R., Peterson, A. and Huberman, E. Mutagenesis by chemical agents in V79 Chinese hamster cells: A review and analysis in literature. A report of the Gene-Tox Program. Mutation Res., 87 , 1981, pp. 81-142 |
| [12] | Demarini, D.M., Dallas, M.M. and Lewtas, J. Cytotoxicity and effect on mutagenicity of buffers in a microsuspension assay. Ter. Carc. Mut., 9 , 1989, pp. 287-295 |
| [13] | Kalweit, S., Utesch, D., von der Hude, U. and Madle, S. Chemically induced micronucleus formation in V79 cells — comparison of three different test approaches. Mutation Res., 439 , 1999, pp. 183-190 |
| [14] | Miller, b., Pujadas, E. and Gocke, E. Evaluation of the micronucleus test in vitro using Chinese hamster cells: Results of 4 chemicals weakly positive in the in vivo micronucleus test. Environ. Mol. Mutagen., 26 , 1995, pp. 240-247 |
| [15] | Richardson, C., Williams, D.A., Allen, J.A., Amphlett, G., Chanter, D.O. and Phillips, B. Analysis of data from in vitro cytogenetic assays. In: Statistical Evaluation of Mutagenicity Test Data (ed. D.J. Kirkland), Cambridge University Press, Cambridge, 1989, pp. 141-154 |
| [16] | Scott, D., Galloway, S.M., Marshall, R.R., Ishidate, JR. M., Brusick, D., Ashby, J. and Myhr, B.C. Genotoxicity under extreme culture conditions. A report from ICPEMC Task Group 9. Mutation Res., 257 , 1991, pp. 147-204 |
| [17] | Speit, G., Haupter, S. and Vogel, W. Characterization of mitosis with sister chromatid differentiation (SCD) and consequences for the analysis of proliferation kinetics and sister chromatid exchanges in asynchronously growing cells. Hum. Genet., 71 , 1985, pp. 358-360 |