※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。
序文
ISO (国際標準化機構) は、国家標準化団体 (ISO メンバー団体) の世界的な連合体です。国際規格の作成作業は通常、ISO 技術委員会を通じて行われます。技術委員会が設立された主題に関心のある各会員団体は、その委員会に代表される権利を有します。政府および非政府の国際機関も ISO と連携してこの作業に参加しています。 ISO は、電気技術の標準化に関するあらゆる事項について、国際電気標準会議 (IEC) と緊密に協力しています。
この文書の開発に使用される手順と、そのさらなる保守を目的とした手順は、ISO/IEC 指令Part 1 部に記載されています。特に、さまざまなタイプの ISO 文書に必要なさまざまな承認基準に注意する必要があります。この文書は、ISO/IEC 指令Part 2 部の編集規則に従って起草されました ( www.iso.org/directives を 参照)
ISO は、この文書の実装に特許の使用が含まれる可能性があることに注意を促しています。 ISO は、請求された特許権に関する証拠、有効性、または適用可能性に関していかなる立場もとりません。この文書の発行日の時点で、ISO はこの文書の実装に必要となる可能性のある特許の通知を受け取っていません。ただし、実装者は、これが www.iso.org/patents で入手可能な特許データベースから取得できる最新の情報を表していない可能性があることに注意してください。 ISO は、かかる特許権の一部またはすべてを特定する責任を負わないものとします。
本書で使用されている商号は、ユーザーの便宜のために提供された情報であり、推奨を構成するものではありません。
規格の自主的な性質、適合性評価に関連する ISO 固有の用語と表現の意味、および貿易の技術的障壁 (TBT) における世界貿易機関 (WTO) 原則への ISO の準拠に関する情報については、 www.iso.org/iso/foreword.html を参照してください。
この文書は、技術委員会 ISO/TC 34, 食品、小委員会 SC 16, 分子バイオマーカー分析のための水平的手法によって作成されました。
ISO 21569 シリーズのすべての部品のリストは、ISO の Web サイトでご覧いただけます。
1 スコープ
この文書は、アルファルファ ( Medicago sativa ) 種子からの DNA 抽出手順、作物/植物/種子/穀物試験サンプル中の除草剤耐性アルファルファ イベント J101 および J163 およびリグニン修飾アルファルファ イベント KK179 の特異的検出手順を規定しています。
検出方法はリアルタイム PCR に基づいており、アルファルファのゲノムとそれぞれの組み込まれた遺伝子構築物間の DNA 遷移配列をターゲットとしています。この方法は、フィグワートモザイクウイルス（ P-FMV ）のプロモーター、リゾビウム・ラジオバクター由来のノパリンシンターゼ遺伝子のターミネーター（ T-nos ）、または構築物CTP2/CP4-EPSPS（除草剤耐性）をコードする配列が試験サンプルのスクリーニング分析によって検出された場合、直接的な事象特異的同定または追跡分析として適用できます。
この文書では、粉砕されたアルファルファ種子とそこから抽出された DNA を使用して方法が検証されました。 PCR 法は、飼料や食料品などの他のマトリックスの分析にも適用できます。これらの PCR 法の適用には、関連するマトリックスから適切な量の増幅可能な DNA を抽出する必要があります。
2 規範的参照
以下の文書は、その内容の一部またはすべてがこの文書の要件を構成する形で本文中で参照されています。日付が記載された参考文献については、引用された版のみが適用されます。日付のない参照については、参照文書の最新版 (修正を含む) が適用されます。
3 用語と定義
この文書の目的には、ISO 16577 で与えられる用語と定義が適用されます。
ISO と IEC は、標準化に使用する用語データベースを次のアドレスで維持しています。
参考文献
| 1 | Alexander , TW, Reuter , T.、 McAllister , TA トランスジェニック品種のモニタリングに使用するアルファルファ (Medicago sativa) 特異的参照遺伝子の定性的および定量的ポリメラーゼ連鎖反応アッセイ。 Ｊ．アグリック．食品化学。 2007, 55, (8)、2918–2922 ページ |
| 2 | Guertler 、P.、 Grohmann 、L.、 Naumann 、H.、 Pavlovic 、M.、 Busch 、U. 遺伝子組み換えアルファルファ イベント J101, J163, および KK179 のイベント特異的 qPCR 検出法の開発。バイオモル。量を検出します。 2019, 17, 記事 100076 |
| 3 | Guertler 、P.、 Grohmann 、L.、 Naumann 、H.、 Pavlovic 、M.、 Busch 、U.「遺伝子組み換えアルファルファ イベント J101, J163 および KK179 に対するイベント特異的 qPCR 検出法の開発」の訂正。 Biomol 検出定量。 2019, 17, 記事 100076 |
| 4 | BVL G 30.40-19, アルファルファ種子からの DNA 抽出および遺伝子組み換えアルファルファ系統 J101, J163 および KK179 のリアルタイム PCR 検出 [遺伝子組み換えアルファルファ系統 J101, J163 および KK179 のアルファルファ種子からの DNA 抽出およびリアルタイム PCR ベースのイベント特異的検出法 - イベント特異的方法参照:ドイツ遺伝子工学法 (GenTG) の第 28b 条に基づく分析法の公式コレクションベルリン：ビュート、2020 |
| 5 | Holland 、PM, Abramson 、RD, Watson 、R.、 Gelfand 、DH Thermus aquaticus DNA ポリメラーゼの 5'-3' エキソヌクレアーゼ活性を利用した特定のポリメラーゼ連鎖反応生成物の検出。手順国立アカド。科学。 1991, 88, (16)、357-362ページ |
| 6 | CEN/TS 17329-2, 食品 — 定性的リアルタイム PCR 法の検証に関する一般ガイドライン — Part 2: 共同研究 |
| 7 | 連邦消費者保護・食品安全局。定性的リアルタイム PCR 法の研究室間検証のガイドライン。連邦消費者保護・食品安全局 (BVL)、2016 年(ドイツ語) 。 [最終アクセス日 2025-03] から入手可能: https://www.bvl.bund.de/SharedDocs/Downloads/07_Untersuchungen/Leitlinien%20zur%20Ringprüfungs%20Validierung.pdf?__blob=publicationFile&v=5 |
| 8 | Uhlig S.、 Frost K.、 Colson B.、 Simon K.、 Mäde D.、 Reiting R.、 Gowik P.、 Grohmann L. 検出確率の数学的統計モデリングに基づく定性 PCR 法の検証。認定されました。クオリティ。アッシュール。 2015, 20, 75–83 ページ |
| 9 | PCR による遺伝子修飾の分析のための DNA の抽出: 方法の単一研究室および研究室間の検証および抽出された DNA の品質管理に関するガイドライン[ PCR による遺伝子改変の分析のための DNA の抽出: 方法の単一研究室および研究室間の検証および抽出 DNA の品質管理に関するガイドライン] [最終アクセス日 2025-03]: https://www.bvl.bund.de/SharedDocs/Downloads/07_Untersuchungen/Leitfaden%20zur%20Einzellabor-%20und%20Ringprüfungsvalidi eration%20of%20Procedure%20もas%20of%20Quality%C3%A4tscontrol%20of%20extracted%20DNA.pdf?__blob=publicationFile&v=6 |
| 10 | 欧州 GMO 研究所ネットワーク (ENGL) GMO 検査の分析方法の最低性能要件の定義。欧州委員会、2015 年。[最終アクセス日 2025-03] から入手可能: https://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/doc/MPR%20Report%20Application%2020_10_2015.pdf |
| 11 | ISO 5725-2, 測定方法と結果の精度 (真性と精度) — Part 2: 標準測定方法の再現性と再現性を決定するための基本方法 |
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives ).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at www.iso.org/patents . ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html .
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 16, Horizontal methods for molecular biomarker analysis.
A list of all parts in the ISO 21569 series can be found on the ISO website.
1 Scope
This document specifies procedures for DNA extraction from alfalfa (Medicago sativa) seeds and for the specific detection of the herbicide-tolerant alfalfa events J101 and J163 and the lignin-modified alfalfa event KK179 in crop/plant/seed/grain test samples.
The detection methods are based on real-time PCR and are targeting the DNA transition sequences between the alfalfa genome and the respective integrated gene construct. The methods can be applied for direct event-specific identification or as a follow-up analysis, if sequences encoding the promoter of the Figwort mosaic virus (P-FMV), the terminator of the nopaline synthase gene from Rhizobium radiobacter (T-nos), or the construct CTP2/CP4-EPSPS (herbicide tolerance) were detected by screening analyses of test samples.
In this document, the methods were validated using ground alfalfa seeds and DNA extracted thereof. The PCR methods are also applicable for the analysis of other matrices such as feed and foodstuffs. The application of these PCR methods requires the extraction of an adequate amount of amplifiable DNA from the relevant matrix.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
- ISO 16577, Molecular biomarker analysis — Vocabulary for molecular biomarker analytical methods in agriculture and food production
- ISO 21569, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Qualitative nucleic acid based methods
- ISO 21571, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Nucleic acid extraction
- ISO 24276, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — General requirements and definitions
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 16577 apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
Bibliography
| 1 | Alexander, T.W., Reuter, T., McAllister, T.A. Qualitative and Quantitative Polymerase Chain Reaction Assays for an Alfalfa (Medicago sativa)-Specific Reference Gene To Use in Monitoring Transgenic Cultivars. J. Agric. Food Chem. 2007, 55(8), pp. 2918–2922 |
| 2 | Guertler, P., Grohmann, L., Naumann, H., Pavlovic, M., Busch, U. Development of event-specific qPCR detection methods for genetically modified alfalfa events J101, J163 and KK179. Biomol. Detect Quantif. 2019, 17, Article 100076 |
| 3 | Guertler, P., Grohmann, L., Naumann, H., Pavlovic, M., Busch, U. Corrigendum to “Development of event-specific qPCR detection methods for genetically modified alfalfa events J101, J163 and KK179”. Biomol Detect Quantif. 2019, 17, Article 100076 |
| 4 | BVL G 30.40-19, DNA-Extraktion aus Luzernesamen und real-time PCR-Nachweis der gentechnisch veränderten Luzernelinien J101, J163 und KK179 [DNA extraction from alfalfa seeds and real-time PCR based event-specific detection methods for genetically modified alfalfa lines J101, J163 and KK179 — Event-specific methods]. In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 28b GenTG [Official collection of analytical methods according to article 28b of the German Genetic Engineering Act (GenTG)]. Berlin: Beuth, 2020 |
| 5 | Holland, P.M., Abramson, R.D., Watson, R., Gelfand, D.H. Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5′-3′ exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase. Proc. Natl. Acad. Sci. 1991, 88(16), pp. 357–362 |
| 6 | CEN/TS 17329-2, Foodstuffs — General guidelines for the validation of qualitative real-time PCR methods — Part 2: Collaborative study |
| 7 | Federal Office of Consumer Protection and Food Safety. Guidelines for the interlaboratory validation of qualitative real-time PCR methods. Bundesamt für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit (BVL), 2016 (in German). Available from [last accessed 2025-03]: https://www.bvl.bund.de/SharedDocs/Downloads/07_Untersuchungen/Leitlinien%20zur%20Ringversuchs%20Validierung.pdf?__blob=publicationFile&v=5 |
| 8 | Uhlig S., Frost K., Colson B., Simon K., Mäde D., Reiting R., Gowik P., Grohmann L. Validation of qualitative PCR methods on the basis of mathematical-statistical modelling of the probability of detection. Accred. Qual. Assur. 2015, 20, pp. 75–83 |
| 9 | Extraktion von DNA für die Untersuchung gentechnischer Veränderungen mittels PCR: Leitfaden zur Einzellabor- und Ringversuchsvalidierung von Verfahren sowie der Qualitätskontrolle von extrahierter DNA [Extraction of DNA for the analysis of genetic modifications by PCR: Guideline for single-laboratory and interlaboratory validation of methods and quality control of extracted DNA] Available from [last accessed 2025-03]: https://www.bvl.bund.de/SharedDocs/Downloads/07_Untersuchungen/Leitfaden%20zur%20Einzellabor-%20und%20Ringversuchsvalidierung%20von%20Verfahren%20sowie%20der%20Qualit%C3%A4tskontrolle%20von%20extrahierter%20DNA.pdf?__blob=publicationFile&v=6 |
| 10 | European Network of GMO Laboratories (ENGL). Definition of Minimum Performance Requirements for Analytical Methods of GMO Testing. European Commission, 2015. Available from [last accessed 2025-03]: https://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/doc/MPR%20Report%20Application%2020_10_2015.pdf |
| 11 | ISO 5725-2, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method |