JIS K 3703-1:2004 コアグラーゼ陽性ブドウ球菌（黄色ブドウ球菌など）の菌数測定方法―第１部：ベアード・パーカー寒天培地

                                                                                 K 3703-1 : 2004

まえがき

  この規格は,工業標準化法第12条第1項の規定に基づき,財団法人バイオインダストリー協会(JBA)/
財団法人日本規格協会(JSA)から,工業標準原案を具して日本工業規格(日本産業規格)を制定すべきとの申出があり,日本
工業標準調査会の審議を経て,経済産業大臣が制定した日本工業規格(日本産業規格)である。
  制定に当たっては,日本工業規格(日本産業規格)と国際規格との対比,国際規格に一致した日本工業規格(日本産業規格)の作成及び日
本工業規格を基礎にした国際規格原案の提案を容易にするために,ISO 6888-1:1999,Microbiology of food
and animal feeding stuffs−Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci
(Staphylococcus aureus and other species)−Part 1: Technique using Baird-Parker agar mediumを基礎として用い
た。
  この規格の一部が,技術的性質をもつ特許権,出願公開後の特許出願,実用新案権,又は出願公開後の
実用新案登録出願に抵触する可能性があることに注意を喚起する。経済産業大臣及び日本工業標準調査会
は,このような技術的性質をもつ特許権,出願公開後の特許出願,実用新案権又は出願公開後の実用新案
登録出願にかかわる確認について,責任はもたない。
  JIS K 3703-1には,次に示す附属書がある。
    附属書(参考) JISと対応する国際規格との対比表
  JIS K 3703の規格群には,次に示す部編成がある。
    JIS K 3703-1 第1部 : ベアード・パーカー寒天培地
    JIS K 3703-2 第2部 : ウサギ血しょう(漿)フィブリノーゲン寒天培地

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K 3703-1 : 2004

pdf 目 次

ページ

•  0. 序文・・・・[1]
•  1. 適用範囲・・・・[2]
•  2. 引用規格・・・・[2]
•  3. 定義・・・・[2]
•  4. 一般原則 25. 希釈液及び寒天培地・・・・[3]
•  6. 装置及びガラス器具 57. 試料の採取・・・・[6]
•  8. 試料の調製・・・・[6]
•  9. 実施手順・・・・[6]
•  10. 結果の表示 811. 精度・・・・[10]
•  12. 試験報告書・・・・[10]
•  参考文献 10附属書(参考)JISと対応する国際規格との対比表・・・・[11]

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                                       日本工業規格(日本産業規格)                             JIS
                                                                           K 3703-1 : 2004

コアグラーゼ陽性ブドウ球菌(黄色ブドウ球菌など)の菌数測定方法−第1部 : ベアード・パーカー寒天培地

Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci(Staphylococcus aureus and other species)-Part 1:Technique using Baird-Parker agar medium

0. 序文

 この規格は,1999年に第1版として発行されたISO 6888-1:1999,Microbiology of food and animal
feeding stuffs−Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus
and other species)−Part 1: Technique using Baird-Parker agar mediumを翻訳し,技術的内容を変更して作成し
た日本工業規格(日本産業規格)である。
  なお,この規格で点線の下線を施してある箇所は,原国際規格を変更している事項である。変更の一覧
表をその説明を付けて,附属書(参考)に示す。

1. 適用範囲

 この規格は,ベアード・パーカー寒天培地(以下、寒天培地という。)を用いて35 ℃又は
37 ℃で好気的に培養して得られるコロニー数を測定する方法について規定する。
  この規格は、人が摂取する食品及び動物用飼料(これらは、工業標準化法の適用対象となるものに限る。)
中に存在するコアグラーゼ陽性ブドウ球菌の菌数測定を目的とする[参考文献1)]。
 食品及び動物用飼料には多種多様な製品が存在するため,特定の製品に関しては,この測定方法がすべ
てに適しているとは限らない。その場合,正当な技術的理由があれば,このような製品に限定される別の
方法を用いてもよい。しかし,可能な限りこの測定方法を適用するように努めなければならない。
 JIS K 3703規格群で,エンテロトキシン産生株を含むコアグラーゼ陽性ブドウ球菌の菌数測定方法につ
いて二つの測定方法(JIS K 3703-1及びJIS K 3703-2)を規定している。主に黄色ブドウ球菌(Staphylococcus
aureus)が対象であるが,S. intermedius 及び S. hyicus の一部も対象となる。
  一般的にはJIS K 3703-1をエンテロトキシン産生株を含むコアグラーゼ陽性ブドウ球菌の菌数測定に適
用する。しかし,次に示す菌によって汚染される可能性のある食材(生乳から製造されたチーズ及び生肉
製品など工業標準化法の対象とならないものは除く。)に限っては,JIS K 3703-2に示す手順を適用するこ
とが望ましい。
− ベアード・パーカー寒天培地上に非定形コロニーを形成するブドウ球菌

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2
K3703-1:2004
− 求めるコロニーが埋もれてしまうようなバックグラウンド・フローラ〔細菌そう(叢)〕
 JIS K 3703-1では,ブドウ球菌の確認はコアグラーゼ陽性反応に基づいている。しかし,黄色ブドウ球
菌にはコアグラーゼ陽性反応が弱い菌株があることが知られている。この反応の弱い菌株は他の細菌と混
同される可能性があるが,JIS K 3703-1には含まれていない試験を追加することによって識別することが
できる。その試験法には,リゾスタフィンの感受性,溶血性毒素の産生,耐熱性ヌクレアーゼの産生,マ
ンニトール分解による酸産生の試験などがある[参考文献2)]。
    備考 この規格の対応国際規格を,次に示す。
            なお,対応の程度を表す記号は,ISO/IEC Guide 21に基づき,IDT(一致している),MOD
          (修正している),NEQ(同等でない)とする。
          ISO 6888-1:1999,Microbiology of food and animal feeding stuffs−Horizontal method for the
              enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species)−Part
              1: Technique using Baird-Parker agar medium (MOD)

2. 引用規格

 次に掲げる規格は,この規格に引用されることによって,この規格の規定の一部を構成す
る。これらの引用規格は,その最新版(追補を含む。)を適用する。
    JIS K 3702-2 コアグラーゼ陽性ブドウ球菌(黄色ブドウ球菌など)の菌数測定方法−第2部 : ウサ
        ギ血しょう(漿)フィブリノーゲン寒天培地
    ISO 6887-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs−Preparation of the test sample, initial
        suspension and decimal dilutions for microbiological examination−Part 1: General rules for the
        preparation of the initial suspension and decimal dilutions
    ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs−General rules for microbiological examination

3. 定義

 この規格で用いる主な用語の定義は,次による。
3.1   コアグラーゼ陽性ブドウ球菌(coagulase-positive staphylococci) この規格の試験によって,寒天培
地上に定形及び/又は非定形コロニーを形成し,コアグラーゼ陽性反応を示す細菌。
3.2                                                                                          こ
      コアグラーゼ陽性ブドウ球菌の菌数測定(enumeration of the coagulase-positive staphylococci)
の規格の試験によって得られる製品1 ml又は1 g当たりのコアグラーゼ陽性ブドウ球菌の数の測定。
3.3   精製水 JIS K 8008の3.2に規定するA2の水。
    備考 これを超す精製度のものを使用することに関しては制限しない。
            なお,滅菌水は,イオン交換水の品質以上のものをオートクレーブ滅菌又はフイルターでろ
          過し滅菌したものとする。また,市販の精製水を用いる場合は,この規定の精製水と同等以上
          の品質のものとする。
4. 一般原則
4.1   製品が液体の場合は規定量の製品を,液体でない場合は規定量の試料懸濁液を試料とし,寒天平板
培地2枚に塗抹する。さらに,試料の10倍段階希釈液を同一希釈段階につき寒天平板培地2枚に塗抹する。
4.2   35 ℃又は37 ℃(1)で各寒天平板培地を好気的に培養し,24時間後及び48時間後に判定する。
    注(1) この温度は,関係者で合意を得るものとし,試験報告書に記載する。

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                                                                                 K 3703-1 : 2004
4.3   菌数測定のための適切な希釈段階(9.4)の寒天平板培地に発育した定形及び/又は非定形コロニー
数を測定し,併せてコアグラーゼ試験結果が陽性であることを確認したうえで,製品1 ml又は1 g当たり
のコアグラーゼ陽性ブドウ球菌数とする。
5. 希釈液及び寒天培地
5.1   一般的な試験指針 一般的な試験指針はISO 7218による。
5.2   希釈液 ISO 6887-1及び試験対象の製品を規定する規格による。
5.3   ベアード・パーカー寒天培地(2) 市販の培地を用いてもよい。その場合,製造業者の取扱説明書
に厳密に従う。
    注(2)   roteus属の存在が疑われるときは,ベアード・パーカー寒天培地[参考文献2)]にスルファメ
          タジン[参考文献3)]を加える。
5.3.1  基礎培地
5.3.1.1  組成
                                     表 1 基礎培地の組成
                                                  単位 : 培地1 000 ml当たりの成分の質量
             カゼインペプトン(パンクレアチン消化物)                 10.0 g
             酵母エキス                                                1.0 g
             肉エキス                                                  5.0 g
             ピルビン酸ナトリウム                                     10.0 g
             グリシン                                                 12.0 g
             塩化リチウム                                              5.0 g
             寒天                                                 1222 g(3)
             精製水                                                残量(ml)
                注(3) 寒天のゲル強度による。
5.3.1.2  調製 各成分又は粉末基礎培地に精製水を加え,加温して溶解する。必要であれば,滅菌後25 ℃
でpHが7.2±0.2となるようにあらかじめ調整し,適切な容量のフラスコ又は瓶に100 mlずつ分注する。
その後,速やかに121 ℃で15分間,滅菌する。
5.3.2   溶液
5.3.2.1  亜テルル酸カリウム溶液
5.3.2.1.1 組成
                              表 2 亜テルル酸カリウム溶液の組成
            亜テルル酸カリウム (K2TeO3)(4)                           1.0 g
            精製水                                                   100 ml
                注(4) 市販の亜テルル酸カリウムがこの試験に適していることを事前に確認してお
                     くことが望ましい(5.3.2.1.2)。
5.3.2.1.2 調製 最小限の加熱で亜テルル酸カリウムを精製水に完全に溶解する。固形物は,白色の不溶
物が水中に生じるものは用いない。その後,速やかに孔径0.22               ンブランフィルターを用いてろ過
し,滅菌する。溶液は調製後,3 ℃±2 ℃で保存し,1か月以内に用いる。ただし,白色の沈殿物が生じ
たものは用いない。
5.3.2.2  卵黄液 濃度は、約20       は製造業者の取扱説明書による。
    備考 調製済みの市販品があれば,それを用いる。自製するときは,無きずの殻をもつ新鮮な鶏卵を
          用い,液体洗剤とブラシを用いて卵を洗浄し,流水ですすぐ。その後,エタノール(体積分率

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