JIS T 8061:2015 血液及び体液の接触に対する防護服―防護服材料の血液媒介性病原体に対する耐浸透性の求め方―Ｐｈｉ－Ｘ１７４バクテリオファージを用いる試験方法 | ページ 4

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   1 圧縮空気又は窒素ガス                    9  安全カバー
  2 コネクタ                                 10 浸透テストセル
  3 空気圧力調整器                           11 排出弁
  4 安全弁                                   12 クランプ
  5 圧力計                                   13 受け皿
  6 セル用ベントバルブ                       14 クランプ止め具
  7 8のゴム製空気ホースを接続する めす継手   15 8のゴム製空気ホースを接続する おす継ぎ手付きトッ
  8 7に接続する おす継手及び15に接続する めす   プポート(試験液注入口を兼ねる。)
     継ぎ手付きゴム製空気ホース
                                図2−試験装置例(三次元側面図)

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                                                                                      単位 mm
               1 ホース継手用ねじ山
               2 排出弁用ねじ山
                                   図3−浸透テストセル本体例

――――― [JIS T 8061 pdf 17] ―――――

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                                         附属書JA
                                          (参考)
               液体培養によるバクテリオファージ原液の調製方法
JA.1 調製方法の例
  この規格に用いる液体培養によるバクテリオファージ原液の調製方法について記載する。
JA.2 大腸菌の培養
  大腸菌の培養方法は,次による。
a) 大腸菌株から,ブイヨン1025 mLを入れた250 mLの三角フラスコに1白金耳を接種し,温度36±
    1 ℃に設定した培養器で一晩培養する。
b) 一晩培養した細菌培養液の1/100量(0.10.25 mL)を新たなブイヨン100 mLを入れた1 000 mLの三
    角フラスコに移植する。
      注記 菌が増殖しやすい環境を作るため,ブイヨンの量はフラスコの容量の1/6以下とする。
c) 36±1 ℃に設定した振とう(盪)培養器又は振とう可能な恒温水槽で振とう培養する。大腸菌が(3.0
    ±1.0)×108 CFU/mLの密度に達するまで培養を継続する。
      注記 あらかじめ,大腸菌数及び大腸菌液の透過率(濁度)の関係を,分光光度計などで求めてお
            くとよい。
JA.3 バクテリオファージ原液の調製
a) 大腸菌濃度が(3.0±1.0)×108 CFU/mLになった時点で,m.o.i(Multiplicity of infection,多重感染価,
    バクテリオファージ感染価/大腸菌数)が,0.12.0程度になるように希釈した感染用バクテリオフ
    ァージ液を,大腸菌を入れたフラスコに加えて感染させる。
b) バクテリオファージを感染させた大腸菌液を,36±1 ℃で,15時間激しく振とうしながら培養する。
    又は,完全に溶菌するまで培養する。吸光度の低下が止まったときに,完全に溶菌したとみなされる。
c) 培養液を遠心分離(4 ℃,10 000 xg,20分間)した後,上澄みをきれいな試験管に移す。
      注記 遠心後の沈さ(渣)と上澄みとの界面には,溶菌した大腸菌の層が存在するので,界面近く
            まで上澄みを取らないように注意深く作業する。
d) バクテリオファージを含む上澄みをポアサイズが0.22 m径のポリビニリデンフルオライド(PVDF)
    製又はポリエーテルスルホン(PES)製ディスポーザブル・メンブラン・フィルタでろ過する。
e) ろ過液を,バクテリオファージ原液として,力価を測定し,5±3 ℃で冷蔵保存する。

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                                         附属書JB
                                          (参考)
              平板培地を用いたバクテリオファージ原液の調製方法
JB.1 調製方法の例
  この規格に規定する平板培地を用いたバクテリオファージ原液の調製方法について記載する。
JB.2 大腸菌の培養
  平板培地を用いた大腸菌の培養方法は,次による。
a) 大腸菌株から普通寒天培地(Nutrient agar)に移植し,温度36±1 ℃に設定した培養器で(1824)
    時間培養する。
b) この培養菌から,ブイヨン培地100 mLに1白金耳移植する。
c) 36±1 ℃で静置培養若しくは,振とう(盪)培養器又は振とう可能な恒温水槽で振とう培養する。(1.0
    ×108)CFU/mL以上の密度に達するまで培養を継続する。
    注記 あらかじめ,大腸菌数及び大腸菌液の透過率(濁度)の関係を.分光光度計などで求めておく
          とよい。
JB.3 バクテリオファージ原液の調整
a) 90 mmのペトリ皿に底層培地を約1520 mL分注し,作製した平板培地を,必要な枚数用意する。
      注記 必要に応じて,90 mmより大きなペトリ皿を用いる場合もある。
b) 表層培地を4550 ℃に設定した恒温槽で保温する。
c) 大腸菌濃度が(1.0×108)CFU/mLになった時点で,m.o.i(Multiplicity of infection,多重感染価,バク
    テリオファージ感染価/大腸菌数)が,0.11.0程度になるように希釈した感染用バクテリオファー
    ジ液を,大腸菌を入れた試験管に加えて感染させる。この試験管を,試験管ミキサーで混合し,36±1 ℃
    で10分間静置する。静置後の試験管に,4550 ℃に保温した表層培地を加え,試験管ミキサーで混
    合する。その後,底層培地に重層し,36±1 ℃で1824時間培養する。
d) 培養後の表層培地を試験管に回収し,遠心分離(4 ℃,10 000 xg,20分間)した後,上澄みをきれい
    な試験管に移す。
      注記 遠心後の沈さ(渣)と上澄みとの界面には,溶菌した大腸菌の層が存在するので,界面近く
            まで上澄みを取らないように注意深く作業する。
e) バクテリオファージを含む上澄みをポアサイズが0.22 m径のポリビニリデンフルオライド(PVDF)
    製又はポリエーテルスルホン(PES)製ディスポーザブル・メンブラン・フィルタでろ過する。
f)  ろ過液を,バクテリオファージ原液として,力価を測定し,(5±3)℃で冷蔵保存する。

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                                          参考文献
[1] TELFORD, G.L. and QUEBBEMAN, E.J. Assessing the risk of blood exposure in the operating room.
    American Journal of Infection Control, 21 (6), December 1993, pp. 351-356
[2] Geigy Scientific Tables, Volume 1: Units of measurement, body fluids, composition of blood, hematology,
    somatometric data. (Lentner, C. ed.)   edical Education Division, Ciba-Geigy Corporation, West Caldwell, NJ,
    1984
[3] MCCULLOUGH, E.A. and SCHOENBERGER, L.K. Liquid barrier properties of nine surgical gown fabrics.
    INDA Journal of Nonwovens Research, 3 (3), 1991, pp. 14-20
[4] SMITH, J.W. and NICHOLS, R.L. Barrier efficiency of surgical gowns. Archives of Surgery, 126, June 1991,
    pp. 756-762
[5] ALTMAN, K.W. et. al. Transmural surgical gown pressure measurements in the operating theater. American
    Journal of Infection Control, 19, 1991, pp. 147-155
[6] LYTLE, C.D. and BAKER, K.H. Ability of a viral penetration test (ASTM F1671-95)   o detect small holes.
    Journal of Testing and Evaluation (JTEVA), 27 (3), May 1999, pp. 231-233
[7] ASTM F1671, Standard test method for resistance of materials used in protective clothing to penetration by
    blood-borne pathogens using Phi-X174 bacteriophage penetration as a test system
[8] 一般社団法人日本電機工業会 : 空気清浄機の浮遊ウイルスに対する除去性能評価試験方法
[9] JIS R 1706:2013 ファインセラミックス−光触媒材料の抗ウイルス性試験方法−バクテリオファージ
    Qβを用いる方法

――――― [JIS T 8061 pdf 20] ―――――

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