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※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。
導入
生態毒性試験システムは、土壌中の汚染物質の影響に関する情報を取得するために適用され、従来の化学分析を補完するために提案されています (参考文献 [2] および [4] を参照)参考文献 [2] には推奨および標準化された検査システムのリストと簡単な特徴付けが含まれており、参考文献 [4] にはバイオアッセイの選択と評価に関するガイダンスが記載されています。土壌溶出液を使用する水生試験システムは、水路（土壌の保持機能）によって地下水に到達する可能性のある汚染物質の割合に関する情報を取得するために適用されますが、陸上試験システムは土壌の生息環境機能を評価するために使用されます。
土壌に生息するトビムシは、生態毒性試験の対象となる生態学的に関連のある種です。トビムシはさまざまな内生および後生無脊椎動物の餌となる動物であり、土壌の分解プロセスに貢献します。酸性土壌ではミミズは通常存在しないため、その機能に関してはおそらくエンキトレイド類に加えて最も重要な土壌無脊椎動物である。 [ 19] さらに、トビムシは、ミミズ[ 1] やエンキトライド類と比較して、異なる経路と異なる曝露速度を持つ節足動物種を代表します。 [ 3] バイオアッセイではさまざまな種が使用され、そのうちの 4 種、 Folsomia candida Willem, Folsomia fimetaria L.、 Onychiurus armatus 、 Orchesella cinctaが最も一般的に使用されました。 [ 20] カナダ環境局 (EC) が支援した多数の土壌毒性試験の結果、トビムシに対する汚染土壌サンプルの致死毒性および亜致死毒性を測定するための生物学的試験法の開発と標準化が行われました。 [ 10] EC によって作成されたメソッドには、 Orthonychiurus folsomi 、 Proisotoma minuta 、 F. candida 、およびF. fimetariaの 4 つの種が含まれています。土壌の生息機能の指標生物としてトビムシを使用する標準化された試験系として、さらに 2 つの方法が存在します。 1 つは、土壌中のトビムシ、 F. fimetariaおよびF. candidaの繁殖生産量に対する物質の影響を評価するために設計されており[ 19], [21] 、ここで説明されているもう 1 つの方法は、汚染された土壌の検査に焦点を当てています。必要に応じて、この方法は、標準的な土壌（例えば人工土壌）に添加された物質のトビムシに対する亜致死危険潜在性を試験するために使用できます。
この文書は、 Folsomia candida Willem 種のトビムシ成虫に対する汚染土壌の亜致死効果の測定に基づく方法について説明しています。この種は世界中に分布しています。 F. fimetariと同様の生態学的役割を果たします[ 10], [19] 。 F. カンジダは単為生殖で繁殖し、市販されており培養が容易なため、容易に入手できる種です。 F. カンジダは土壌節足動物、特にトビムシの代表であると考えられています。トビムシの生態と生態毒性試験におけるそれらの使用に関する背景情報は、参考文献 [22] で入手できます。
特徴的なトビムシ属の種は、世界中のさまざまな土壌深さおよびさまざまな土壌タイプのさまざまな生態学的地位に生息しています。 F. カンジダは代替種と考えられているため、生態毒性学的生殖試験で頻繁に使用されますが、ほとんどの自然土壌では一般的ではありません。 [ 28] さらに、種特有の形態学的適応は、生物に対する化学物質の曝露と毒性影響に影響を与える可能性がある。 [ 102] したがって、異なる形態学的適応を表すさまざまなトビムシ属の種を使用することは、このグループの広範囲の感受性を得るのに有利である可能性がある。したがって、 F. fimetaria (euedaphic, 世界中に分布し、農地土壌に生息する[ 28] )、 Onychirus yodai (euedaphic のアジア種[ 31] 、 Proisotoma minuta (半枝性、世界中に分布し、農地土壌に生息する[ 31] )などの他の種。 36] )、 Protaphorura fimata (euedaphic, 温帯から寒帯にかけて発生[ 31], [37] )、 Sinella curviseta (epedaphic, 北米からヨーロッパ、東南アジア、日本に分布[ 42] ) を潜在的存在として追加これらの種は以前にも生態毒性試験種として使用されていますが、利用可能な試験経験は限られています。
物質の効果は、標準的な土壌、できれば定義された人工土壌基質を使用して評価されます。汚染された土壌の場合、その影響は試験対象の土壌と対照土壌で測定されます。研究の目的に応じて、対照および希釈基質（汚染土壌の希釈系列）は、試験対象の土壌に匹敵する非汚染土壌（基準土壌）または標準土壌（人工土壌など）のいずれかです。
注試験物質の安定性は試験期間にわたって保証されない。試験方法には、試験対象物質の残留性を監視するための規定はありません。
Introduction
Ecotoxicological test systems are applied to obtain information about the effects of contaminants in soil and are proposed to complement conventional chemical analysis (see References [2] and [4]). Reference [2] includes a list and short characterization of recommended and standardized test systems and Reference [4] gives guidance on the choice and evaluation of the bioassays. Aquatic test systems with soil eluate are applied to obtain information about the fraction of contaminants potentially reaching the groundwater by the water path (retention function of soils), whereas terrestrial test systems are used to assess the habitat function of soils.
Soil-dwelling Collembola are ecologically relevant species for ecotoxicological testing. Springtails are prey animals for a variety of endogeic and epigeic invertebrates and they contribute to decomposition processes in soils. In acidic soils they are probably the most important soil invertebrates besides enchytraeids with respect to that function, since earthworms are typically absent.[19] Additionally, Collembola represent arthropod species with a different route and a different rate of exposure compared to earthworms[1] and enchytraeids.[3] Various species were used in bioassays of which four species were used most commonly, Folsomia candida Willem, Folsomia fimetaria L., Onychiurus armatus, and Orchesella cincta.[20] Numerous soil toxicity tests supported by Environment Canada (EC) resulted in the development and standardization of a biological test method for determining the lethal and sublethal toxicity of samples of contaminated soil to Collembola.[10] The method prepared by EC includes four species, Orthonychiurus folsomi, Proisotoma minuta, F. candida, and F. fimetaria. As standardized test systems using Collembola as indicator organisms for the habitat function of soil, another two methods exist. One is designed for assessing the effects of substances on the reproductive output of the Collembola, F. fimetaria and F. candida in soil[19],[21], and the other method described here, focuses on testing contaminated soil. Optionally the method can be used for testing substances added to standard soils (e.g. artificial soil) for their sublethal hazard potential to Collembola.
This document describes a method that is based on the determination of sublethal effects of contaminated soils to adult Collembola of the species Folsomia candida Willem. The species is distributed worldwide. It plays a similar ecological role to F. fimetari[10],[19]. F. candida reproduces parthenogenetically and is an easily accessible species as it is commercially available and easy to culture. F. candida is considered to be a representative of soil arthropods and Collembola in particular. Background information on the ecology of springtails and their use in ecotoxicological testing is available in Reference [22].
Distinct Collembolan species inhabit various ecological niches at different soil depths and in different soil types across the globe. Although considered a surrogate species and therefore frequently used in ecotoxicological reproduction tests, F. candida is not common in most natural soils.[28] Furthermore, species specific morphological adaptations can influence exposure and toxic effects of chemicals on organisms.[102] Thus, the use of a variety of Collembolan species representing different morphological adaptations can be advantageous to obtain a broad spectrum of sensitivities for this group. Therefore, other species like F. fimetaria (euedaphic, distributed worldwide and found in agricultural soils[28]), Onychirus yodai (an euedaphic Asian species,[31]Proisotoma minuta (hemiedaphic, distributed worldwide and inhabiting agricultural soils [31],[36]), Protaphorura fimata (euedaphic, occuring through mild temperate to cold zones [31],[37]), and Sinella curviseta (epedaphic, distributed from North America to Europe, Southeast Asia and Japan [42]) were added as potential alternative test species (Annex E). These species have been used as ecotoxicological test species before, but available testing experience is limited.
Effects of substances are assessed using a standard soil, preferably a defined artificial soil substrate. For contaminated soils, the effects are determined in the soil to be tested and in a control soil. According to the objective of the study, the control and dilution substrate (dilution series of contaminated soil) are either an uncontaminated soil comparable to the soil to be tested (reference soil) or a standard soil (e.g. artificial soil).
NOTE The stability of the test substance cannot be ensured over the test period. No provision is made in the test method for monitoring the persistence of the substance under test.