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ISO/TS 20224-1:2020 分子バイオマーカー分析—リアルタイムPCRによる食品および飼料中の動物由来物質の検出—パート1：牛のDNA検出法 | ページ 2

※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。

序文

ISO (国際標準化機構) は、各国の標準化団体 (ISO メンバー団体) の世界的な連合です。国際規格の作成作業は、通常、ISO 技術委員会を通じて行われます。技術委員会が設立された主題に関心のある各会員団体は、その委員会に代表される権利を有します。 ISOと連携して、政府および非政府の国際機関もこの作業に参加しています。 ISO は、電気技術の標準化に関するすべての問題について、国際電気標準会議 (IEC) と緊密に協力しています。

この文書の作成に使用された手順と、今後の維持を意図した手順は、ISO/IEC 指令で説明されています。 1. 特に、さまざまなタイプの ISO 文書に必要なさまざまな承認基準に注意する必要があります。この文書は、ISO/IEC 指令の編集規則に従って作成されました。 2 ( www.iso.org/directives を参照)

このドキュメントの要素の一部が特許権の対象となる可能性があることに注意してください。 ISO は、そのような特許権の一部またはすべてを特定する責任を負わないものとします。ドキュメントの開発中に特定された特許権の詳細は、序文および/または受信した特許宣言の ISO リストに記載されます ( www.iso.org/patents を参照)

このドキュメントで使用されている商号は、ユーザーの便宜のために提供された情報であり、保証を構成するものではありません。

規格の自主的な性質の説明、適合性評価に関連する ISO 固有の用語と表現の意味、および技術的貿易障壁 (TBT) における世界貿易機関 (WTO) の原則への ISO の準拠に関する情報については、以下を参照してください。 www.iso.org/iso/foreword.html .

この文書は、技術委員会 ISO/TC 34, 食品、小委員会 SC 16, 分子バイオマーカー分析のための水平的方法によって作成されました。

ISO 20224 シリーズのすべての部品のリストは、ISO Web サイトで見つけることができます。

序章

食品や飼料への不正な肉の混入は、公共の安全と商業の両方を脅かします。異物混入は、民族学的な食事規則、経済発展、社会的安定を順守する人々に影響を与える可能性があります。この文書は、食品および飼料の成分に存在する核酸から食肉動物種を同定するためのリアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (リアルタイム PCR) 分析法を提供します。

食品および飼料中の動物由来の生物学的物質は、実験室で次の一連の (または同時の) ステップで検出および識別されます: テスト部分/サンプルの調製、核酸の抽出と精製、PCR 増幅、および結果の解釈。この文書は、ウシ DNA 検出に特有の PCR 増幅と結果の解釈に関するガイダンスを提供します。

ISO 20224 シリーズは、特定のアプリケーションを説明する技術仕様で構成されています。今後確立される新しい種の DNA 検出方法は、独立したパーツとして追加されます。

1 スコープ

このドキュメントでは、食物や飼料に由来するウシ特異的 DNA を定性的に検出するためのリアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (リアルタイム PCR) 法を規定しています。関連するマトリックスから十分な量の PCR 増幅可能な DNA を抽出する必要があり、タウリン ( Bos taurus ) やゼブ ( Bos indicus ) などのウシ由来のウシ材料の検出に適用できます。このアッセイでは、バイソン ( Bison bison ) とヤク ( Bos mutus ) の種も検出されます。

標的配列は、染色体 25 のウシ核ベータ アクチン遺伝子の部分フラグメント (つまり、GenBank アクセッション番号 NC_037352.1) [1][2][3]であり、ハプロイド ゲノムごとに 1 つのコピーとして存在します。このターゲットに対して提供されている PCR アッセイでは、反応あたり 5 コピーの絶対検出限界があり、この濃度で 95% 以上の再現性があります (LOD 95% )

2 参考文献

以下のドキュメントは、その内容の一部またはすべてがこのドキュメントの要件を構成するように、本文で参照されています。日付のある参考文献については、引用された版のみが適用されます。日付のない参照については、参照文書の最新版 (修正を含む) が適用されます。

  • ISO 16577, 分子バイオマーカー分析 — 用語と定義
  • ISO 20813, 分子バイオマーカー分析 — 食品および食品中の動物種の検出および同定のための分析方法 (核酸ベースの方法) — 一般的な要件および定義
  • ISO 21571, 食品 — 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出のための分析方法 — 核酸抽出
  • ISO 24276, 食品 - 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出のための分析方法 - 一般要件および定義

3 用語と定義

このドキュメントの目的のために、ISO 16577 に記載されている用語と定義が適用されます。

ISO と IEC は、次のアドレスで標準化に使用する用語データベースを維持しています。

参考文献

[1]Harhay G, Sonstegard T, Keele J, Heaton M, Clawson M, Snelling W, Wiedmann R, VanTassell C, Smith T. 954 ウシの完全 CDS cDNA 配列の特徴付け。 BMCゲノミクス。 2005, 6 , pp. 166–176
[2]Köppel R.、 Ruf J.、 Rentsch J. 牛肉、豚肉、馬、羊からの DNA の検出と定量化のためのマルチプレックス リアルタイム PC Eur Food Res Technol. 2011, 232 , pp.151–155
[3]Köppel R.、 Ruf J.、 Zimmerli F.、 Breitenmoser A. 牛肉、豚肉、鶏肉、七面鳥からの DNA の検出と定量のためのマルチプレックス リアルタイム PC Eur Food Res Technol. 2008, 227 , pp. 1199–1203
[4]Cai YC, Wang Q, he YP, Pan LW ウシおよびヒツジ由来物質のリアルタイム PCR 検出法の相互検証。食肉科学。 2017, 134 , pp.119–123
[5]メソッド性能研究の設計、実施、および解釈のためのHorwitz W. プロトコル。ピュアとアプリケーション。 Chem. 1995, 67, pp. 331-343
[6]共同研究による定性的なリアルタイム PCR 法の検証のためのガイドライン。連邦消費者保護および食品安全局。連邦消費者保護食品安全局 (BVL)
[7]Uhlig S.、 Frost K.、 Colson B.、 Simon K.、 Mäde D.、 Reiting R.、 Gowik P.、 Grohmann L. 検出確率の数学的統計モデリングに基づく定性的 PCR 法の検証。認定された品質保証。 2015, 20, pp. 75–83
[8]国立バイオテクノロジー情報センター (NCBI) (2019-07-28 にアクセス) で入手可能: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome

Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described in the ISO/IEC Directives, 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the ISO/IEC Directives, 2 (see www.iso.org/directives ).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents ).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html .

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 16, Horizontal methods for molecular biomarker analysis.

A list of all parts in the ISO 20224 series can be found on the ISO website.

Introduction

Fraudulent adulteration of meat in food and feed threatens both public safety and commerce. Adulteration can affect those adhering to ethnological dietary rules, economic development and social stability. This document provides a real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) analytical method for the identification of meat animal species from nucleic acid present in the ingredients of food and feed.

Animal-derived biological materials in food and feed are detected and identified in the laboratory with the following successive (or simultaneous) steps: preparation of the test portion/sample, nucleic acid extraction and purification, PCR amplification and interpretation of results. This document provides guidance for PCR amplification and interpretation of results, specific to bovine DNA detection.

The ISO 20224 series consists of technical specifications that describe specific applications. New species DNA detection methods established in the future will be added as independent parts.

1 Scope

This document specifies a real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) method for the qualitative detection of bovine-specific DNA derived from food and feed. It requires the extraction of an adequate amount of PCR amplifiable DNA from the relevant matrix and can be applied to the detection of bovine material derived from cattle including taurine (Bos taurus) and zebu (Bos indicus). The assay also detects the species bison (Bison bison) and yak (Bos mutus).

The target sequence is a partial fragment of the bovine nuclear beta actin gene in chromosome 25 (i.e. GenBank accession number NC_037352.1)[1][2][3], which is present as a single copy per haploid genome. The provided PCR assay for this target has an absolute limit of detection of five copies per reaction, with ≥ 95 % replicability at this concentration (LOD95 %).

2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

  • ISO 16577, Molecular biomarker analysis — Terms and definitions
  • ISO 20813, Molecular biomarker analysis — Methods of analysis for the detection and identification of animal species in foods and food products (nucleic acid-based methods) — General requirements and definitions
  • ISO 21571, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Nucleic acid extraction
  • ISO 24276, Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — General requirements and definitions

3 Terms and definitions

For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 16577 apply.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

Bibliography

[1]Harhay G., Sonstegard T., Keele J., Heaton M., Clawson M., Snelling W., Wiedmann R., VanTassell C., Smith T. Characterization of 954 bovine full-CDS cDNA sequences. BMC Genomics. 2005, 6 , pp. 166–176
[2]Köppel R., Ruf J., Rentsch J. Multiplex real-time PCR for the detection and quantification of DNA from beef, pork, horse and sheep. Eur Food Res Technol. 2011, 232 , pp. 151–155
[3]Köppel R., Ruf J., Zimmerli F., Breitenmoser A. Multiplex real-time PCR for the detection and quantification of DNA from beef, pork, chicken and turkey. Eur Food Res Technol. 2008, 227 , pp. 1199–1203
[4]Cai Y.C., Wang Q., he Y.P., Pan L.W. Interlaboratory validation of a real-time PCR detection method for bovine- and ovine-derived material. Meat Science. 2017, 134 , pp. 119–123
[5]Horwitz W. Protocol for the design, conduct and interpretation of method performance studies. Pure and Appl. Chem. 1995, 67, pp. 331–343
[6]Guidelines for the validation of qualitative real-time PCR methods by means of a collaborative study. Federal Office of Consumer Protection and Food Safety. Bundesamt für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit (BVL)
[7]Uhlig S., Frost K., Colson B., Simon K., Mäde D., Reiting R., Gowik P., Grohmann L. Validation of qualitative PCR methods on the basis of mathematical-statistical modelling of the probability of detection. Accred Qual Assur. 2015, 20, pp. 75–83
[8]National Center for Biotechnology Information (NCBI). Available at (accessed 2019-07-28): https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome

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