ISO 20395:2019 バイオテクノロジー—核酸標的配列の定量法の性能を評価するための要件—qPCRおよびdPCR

ISO20395:2019の規格概要

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Biotechnology — Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences — qPCR and dPCR

この文書は、特定の核酸配列 (ターゲット) の定量化に使用されるメソッドの性能を評価し、品質を保証するための一般的な要件を提供します。

この文書は、デジタル (dPCR) または定量的リアルタイム PCR (qPCR) 増幅技術を使用した DNA (デオキシリボ核酸) および RNA (リボ核酸) の標的配列の定量に適用できます。ゲノム DNA (gDNA) やプラスミド DNA などの二本鎖 DNA (dsDNA)、一本鎖 DNA (ssDNA)、相補的 DNA (cDNA)、およびリボソーム RNA (rRNA)、メッセンジャー RNA (mRNA)、長鎖および短鎖のノンコーディング RNA [マイクロ RNA (miRNA) および短鎖 RNA を含む一本鎖 RNA (ssRNA) を含む核酸分子に存在する標的配列に適用されます。干渉RNA (siRNA)]、および二本鎖RNA (dsRNA)。

この文書は、ウイルス、原核細胞および真核細胞、無細胞体液（血漿や細胞培地など）、またはインビトロソース（オリゴヌクレオチド、合成遺伝子構築物、インビトロ転写 (IVT) RNAなど）などの生物学的ソースに由来する核酸に適用されます。

この文書は、非常に短い DNA オリゴヌクレオチド (<50 塩基) の定量には適用できません。

この文書の内容は次のとおりです。

— 定量化戦略（qPCR の場合のように検量線を使用する、または dPCR の場合のように分子計数による核酸コピー数の定量化、独立したサンプルと比較した定量化、および比率測定）およびコントロールの使用を含む分析設計。

— 総核酸質量濃度の定量化と、核酸の品質（純度および完全性）の評価を含む核酸サンプルの品質管理。

— PCR アッセイの設計、最適化、インシリコおよびインビトロの特異性試験。

— 許容基準、しきい値設定、正規化を含むデータ品質管理と分析。

— qPCR および dPCR の特定の要件を伴うメソッド検証 (精度、直線性、定量限界、検出限界、真性および堅牢性)。

— 計量学的トレーサビリティを確立し、測定の不確実性を推定するためのアプローチ。

この文書は、生物学的材料のサンプリングまたは生物学的サンプルの処理 (つまり、収集、保存、輸送、保管、処理、および核酸抽出) に関する要件または許容基準を提供しません。また、特定の用途 (例:特定のマトリックス問題が発生する可能性のある食品または臨床用途) に対する要件や許容基準も提供しません。

※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。