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※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。
導入
ISO 18363 シリーズは、エステル結合 MCPD およびグリシドールの測定に使用できる国際標準ファミリーです。この序文では、アナリストがどの方法が適用に適しているかを判断できるように、現在公開または提案されている 3 つの文書で指定されている方法について説明します。各メソッドの詳細な適用は、個々のメソッドの範囲内に含まれます。
ISO 18363-1 [ 1] 、DGF 標準 C-VI 18 (10) [ 2] と同等の差分メソッドであり、AOCS 公式メソッド Cd 29c-13 [ 3] と同一です。簡単に言うと、これはエステル誘導体からの 3-MCPD とグリシドールのアルカリ触媒による迅速な放出に基づいています。その後、グリシドールは誘導 3-MCPD に変換されます。 2 つの部分から構成されます。最初のパート (A) ではエステル結合 3-MCPD とエステル結合グリシドールの合計を決定できますが、2 番目のパート (B) ではエステル結合 3-MCPD のみを決定します。どちらのアッセイも、室温で行われるアルカリ触媒によるアルコリシスによるエステル結合型からの標的分析物 3-MCPD とグリシドールの放出に基づいています。パート A では、酸性化塩化ナトリウム溶液を使用して反応を停止し、その後グリシドールを誘導 3-MCPD に変換します。したがって、パート A では 3-MCPD とグリシドールが区別できなくなります。パート B では、酸性化した塩化物を含まない塩溶液を添加することによって反応を停止します。これにより、グリシドールの誘導 MCPD への変換も防止されます。これにより、パート B により、本物の 3-MCPD コンテンツを決定することができます。最後に、サンプルのグリシドール含有量は両方のアッセイの差 (A – B) に比例し、グリシドールから 3-MCPD への変換率が決定されると計算できます。 ISO 18363-1 は、精製および未精製の植物油脂中のエステル結合 3-MCPD およびグリシドールの迅速な測定に適用されます。 ISO 18363-1 は動物性脂肪や使用済みの揚げ油や脂肪にも適用できますが、これらのマトリックスの分析前に検証研究を行う必要があります。サンプル内の遊離分析物はすべて結果に含まれますが、文書では遊離分析物と結合分析物の区別ができません。しかし、出版時点では、精製植物油および脂肪中のエステル化分析対象物含有量と同程度に高い遊離分析対象物の含有量を示す証拠は研究で示されていません。原理的には、2-MCPD の測定が可能になるように ISO 18363-1 を修正することもできます[ 4] が、やはり、この分析物の分析前に検証研究を行う必要があります。
この文書は、AOCS 公式メソッド Cd 29b-13 [ 5][6] を表します。対応する検証データについては、付録 B を参照してください。簡単に説明すると、これはエステル誘導体からの MCPD とグリシドールのゆっくりとしたアルカリ放出に基づいています。その後、グリシドールは 3-MBPD に変換されます。この文書は、内部標準の使用方法が異なる 2 つのサンプル調製物で構成されています。両方の調製物は、エステル結合 2-MCPD および 3-MCPD の測定に使用されます。パート A では、エステル結合グリシドールの予備結果が決定されます。サンプル中に存在する 3-MCPD は、サンプル前処理によってある程度誘導グリシドールに変換されるため、パート B は、パート A の予備的なグリシドール結果から引き算されるこの誘導グリシドールの量を定量するのに役立ちます。アッセイ A では同位体標識された遊離 MCPD 異性体、パート B では同位体標識されたエステル結合 2-MCPD および 3-MCPD 異性体を使用して、エステル切断の効率をモニタリングできます。アッセイ A および B はどちらも、低温でのゆっくりとしたアルカリ触媒によるアルコリシスによるエステル結合型からの標的分析物 2-MCPD, 3-MCPD, およびグリシドールの放出に基づいています。どちらのサンプル調製でも、酸性化した濃臭化ナトリウム溶液を加えて反応を停止させ、不安定で揮発性のグリシドールを 3-MBPD に変換します。3-MBPD は、安定性とクロマトグラフィー性能に関して 3-MCPD に匹敵する特性を示します。さらに、天然に存在する量の塩化物を含むサンプルの場合、大過剰の臭化物イオンにより、グリシドールからの望ましくない 3-MCPD の形成が防止されます。この文書は、精製および未精製の植物油脂中のエステル結合 3-MCPD, 2-MCPD, およびグリシドールの測定に適用されます。これは動物性脂肪や使用済みの揚げ油や脂肪にも適用されますが、これらのマトリックスを分析する前に検証研究を行う必要があります。サンプル内の遊離分析物はすべて結果に含まれますが、文書では遊離分析物と結合分析物の区別ができません。しかし、この文書の発行時点では、研究では、植物油および脂肪中のエステル化分析物の含有量と同じくらい高い遊離分析物の含有量の証拠は示されていません。
ISO 18363-3 [ 7] 、AOCS 公式メソッド Cd 29a-13 [ 8] [ 9] を表します。簡単に言うと、これは、グリシジルエステルの 3-MBPD エステルへの変換と、エステル誘導体からの MCPD および MBPD の酸触媒によるゆっくりとした放出に基づいています。 ISO 18363-3 は、グリシジルエステルが MBPD モノエステルに変換され、その後、ゆっくりとした酸触媒によるアルコリシスによって遊離分析物 2-MCPD, 3-MCPD, および 3-MBPD が放出される単一サンプル前処理に基づいています。 3-MBPD は、結合グリシドールの真の含有量を表します。 ISO 18363-3 は、精製および未精製の植物油脂中のエステル結合 2-MCPD, 3-MCPD, およびグリシドールの測定に適用できます。動物性脂肪や使用済みの揚げ油や脂肪にも適用できますが、これらのマトリックスの分析前に検証研究を行う必要があります。このメソッドは結合（エステル化）分析物の分析に適していますが、必要に応じて、グリシジルエステルの最初の変換を行わずに ISO 18363-3 を実行することもできます。このような設定では、遊離型と結合型の 2-MCPD および 3-MCPD 形態の両方が結果に含まれ、遊離分析物の量は両方の設定で実行された 2 つの測定の差として計算できます。しかし、この文書の発行時点では、研究では、植物油および脂肪中のエステル化分析物の含有量と同じくらい高い遊離分析物の含有量の証拠は示されていません。
Introduction
The ISO 18363 series is a family of International Standards which can be used for the determination of ester-bound MCPD and glycidol. This introduction describes the methods specified in the three documents currently published or proposed so that the analyst can decide which methods are suitable for application. The detailed application of each method is contained within the scope of the individual method.
ISO 18363-1 [1] is a differential method equivalent to the DGF standard C-VI 18 (10)[2] and identical to AOCS Official Method Cd 29c-13[3]. Briefly, it is based on a fast alkaline catalysed release of 3-MCPD and glycidol from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into induced 3-MCPD. It consists of two parts. The first part (A) allows the determination of the sum of ester-bound 3-MCPD and ester-bound glycidol, whereas the second part (B) determines ester-bound 3-MCPD only. Both assays are based on the release of the target analytes 3-MCPD and glycidol from the ester-bound form by an alkaline catalysed alcoholysis carried out at room temperature. In part A, an acidified sodium chloride solution is used to stop the reaction and subsequently convert the glycidol into induced 3-MCPD. Thus, 3-MCPD and glycidol become indistinguishable in part A. In part B, the reaction stop is achieved by the addition of an acidified chloride-free salt solution which also prevents the conversion of glycidol into induced MCPD. Thereby, part B allows the determination of the genuine 3-MCPD content. Finally, the glycidol content of the sample is proportional to the difference of both assays (A – B) and can be calculated when the transformation ratio from glycidol to 3-MCPD has been determined. ISO 18363-1 is applicable to the fast determination of ester-bound 3-MCPD and glycidol in refined and non-refined vegetable oils and fats. ISO 18363-1 can also apply to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study has to be undertaken before the analysis of these matrices. Any free analytes within the sample would be included in the results, but the document does not allow the distinction between free and bound analytes. However, as of publication, research has not shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in refined vegetable oils and fats. In principle, ISO 18363-1 can also be modified in such a way that the determination of 2-MCPD is feasible[4], but again, a validation study has to be undertaken before the analysis of this analyte.
This document represents AOCS Official Method Cd 29b-13[5][6]. For information on corresponding validation data, see Annex B. Briefly, it is based on a slow alkaline release of MCPD and glycidol from the ester derivatives. Glycidol is subsequently converted into 3-MBPD. This document consists of two sample preparations that differ in the use of internal standards. Both preparations will be used for the determination of ester-bound 2-MCPD and 3-MCPD. In part A, a preliminary result for ester-bound glycidol is determined. Because the 3-MCPD present in the sample will be converted to some minor extent into induced glycidol by the sample preparation, part B serves to quantify this amount of induced glycidol that is subsequently subtracted from the preliminary glycidol result of part A. By the use of isotope-labelled free MCPD isomers in assay A and isotope-labelled ester-bound 2-MCPD and 3-MCPD in part B, the efficiency of ester cleavage can be monitored. Both assays A and B are based on the release of the target analytes 2-MCPD, 3-MCPD, and glycidol from the ester-bound form by a slow alkaline catalysed alcoholysis in the cold. In both sample preparations, the reaction is stopped by the addition of an acidified concentrated sodium bromide solution so as to convert the unstable and volatile glycidol into 3-MBPD which shows comparable properties to 3-MCPD with regard to its stability and chromatographic performance. Moreover, the major excess of bromide ions prevents the undesired formation of 3-MCPD from glycidol in the case of samples which contain naturally occurring amounts of chloride. This document is applicable to the determination of ester-bound 3-MCPD, 2-MCPD, and glycidol in refined and unrefined vegetable oils and fats. It also applies to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study will have to be undertaken before the analysis of these matrices. Any free analytes within the sample would be included in the results, but the document does not allow the distinction between free and bound analytes. However, as of publication of this document, research has not shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in vegetable oils and fats.
ISO 18363-3 [7] represents AOCS Official Method Cd 29a-13[8][9]. Briefly, it is based on the conversion of glycidyl esters into 3-MBPD esters and a slow acidic catalysed release of MCPD and MBPD from the ester derivatives. ISO 18363-3 is based on a single sample preparation in which glycidyl esters are converted into MBPD monoesters, and subsequently, the free analytes 2-MCPD, 3-MCPD, and 3-MBPD are released by a slow acid-catalysed alcoholysis. The 3-MBPD represents the genuine content of bound glycidol. ISO 18363-3 can be applied for the determination of ester-bound 2-MCPD, 3-MCPD, and glycidol in refined and non-refined vegetable oils and fats. It can also apply to animal fats and used frying oils and fats, but a validation study has to be undertaken before the analysis of these matrices. The method is suited for the analysis of bound (esterified) analytes, but if required, ISO 18363-3 can also be performed without the initial conversion of glycidyl esters. In such a setup, both free and bound 2-MCPD and 3-MCPD forms would be included in the results and the amount of free analytes can be calculated as a difference between two determinations performed in both setups. However, as of publication of this document, research has not shown any evidence of a free analyte content as high as the esterified analyte content in vegetable oils and fats.