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※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。
導入
in vitro 感受性試験は、病気の原因と疑われる微生物、特にその微生物が頻繁に使用される抗菌剤に対して獲得耐性を示す可能性のある種に属していると考えられる場合に行われます。この検査は、耐性の監視、感受性の疫学研究、新規および既存の薬剤の比較においても重要です。
希釈手順は、抗菌剤の最小発育阻止濃度 (MIC) を決定するために使用され、抗真菌感受性試験の参照方法となります。 MIC 手法は、耐性監視、研究または登録目的の新薬の比較試験で使用され、日常的な検査で曖昧な結果が得られる微生物の感受性を確立するため、日常的な試験では信頼性が低い場合や定量的な結果が必要な場合where 微生物を用いた試験に使用されます。臨床管理のために。希釈試験では、一連の寒天プレート上 (寒天希釈) または抗菌剤の段階希釈を含むブロス (ブロス希釈) 中で微生物が識別可能な増殖を起こす能力についてテストされます。
定義された in vitro 試験条件下で、定義された期間内に微生物の可視的または光学的に測定可能な増殖を減少させる抗菌剤の最低濃度 (mg/l) は、MIC として知られています。 MIC は、臨床医にとって抗菌薬に対する微生物の感受性のガイドとなり、治療の決定に役立ちます。結果は使用する方法によって影響を受ける可能性があるため、研究室内および研究室間の再現性には慎重な管理と標準化が必要です。ブロス MIC 検査は、真の終点の 1 回の 2 倍希釈以内 (つまり、2 倍希釈系列の ±1 ウェルまたはチューブ) まで再現可能であると一般に認められています。
ブロス希釈は、段階的に (通常 2 倍) 濃度を増加させた抗菌剤溶液を含む同量のブロスを入れた容器に、既知の数の微生物を接種する技術です。
ブロス微量希釈は、微量希釈トレイでのブロス希釈テストのパフォーマンスを示します。
この文書に記載されている参考方法は、酵母菌の純粋培養の試験を目的としています。この文書に記載されているブロスの微量希釈方法は、臨床検査標準協会 (CLSI) [ 1][5] および欧州抗菌感受性試験委員会 (EUCAST) [ 2][10] によって記載されているものと同じです。 。これらの方法は、同一ではないにしても、最大 2 mg/l までは同様のフルコナゾールの MIC を提供することが最初に示されました[ 3] 。さらに、この方法は、本書に記載されているものと同様の、認可された抗真菌剤の 2 つの品質管理株の MIC を提供することが示されていますが、分光光度計の品質管理結果は、目視読み取り方法よりもわずかに低い傾向にある可能性があります。新しい抗真菌薬の研究を実施するために、または診断装置によって生成される MIC と比較するための参照方法としてこの文書を使用したい研究室は、視覚的に判断された MIC 読み取り値の選択に基づいて、どの手順オプションを使用するかを選択できます。検査（CLSI法） [ 5] または分光光度計を使用した検査（EUCAST法） [ 2] [10] 。いずれの場合も、そのオプションの手順の詳細に明示的に従う必要があります。この文書の初版、つまり ISO 16256:2012 では、報告された品質管理テストは、プラスチックトレイの製造業者によって視覚法または分光光度計法のいずれの処理も一切行われていないブロス微量希釈トレイを使用して実施されました。
この文書では、次のような口頭形式が使用されています。
- 「するものとする」は要件を示します。
- 「すべき」は推奨を示します。
- 「かもしれない」は許可を示します。
- 「できる」は可能性や能力を示します。
警告この文書の使用には、危険な物質、作業、および機器が含まれる可能性があります。この文書は、その使用に関連するすべての安全上の問題に対処することを目的とするものではありません。適切な安全衛生慣行を確立し、使用前に規制上の制限の適用可能性を判断するのは、この文書のユーザーの責任です。
Introduction
In vitro susceptibility tests are performed on microorganisms suspected of causing disease, particularly if the organism is thought to belong to a species that can exhibit acquired resistance to frequently used antimicrobial agents. The tests are also important in resistance surveillance, epidemiological studies of susceptibility and in comparisons of new and existing agents.
Dilution procedures are used to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) of antimicrobial agents and represent the reference method for antifungal susceptibility testing. MIC methods are used in resistance surveillance, comparative testing of new agents for research or registration purposes, to establish the susceptibility of organisms that give equivocal results in routine tests, for tests with organisms where routine tests can be unreliable and when a quantitative result is needed for clinical management. In dilution tests, microorganisms are tested for their ability to produce discernible growth on a series of agar plates (agar dilution) or in broth (broth dilution) containing serial dilutions of the antimicrobial agent.
The lowest concentration of an antimicrobial agent (in mg/l) that, under defined in vitro test conditions, reduces visible or optically measurable growth of a microorganism within a defined period of time is known as the MIC. The MIC is a guide for the clinician to the susceptibility of the organism to the antimicrobial agent and aids treatment decisions. Careful control and standardization are required for intra- and inter-laboratory reproducibility, as results can be influenced by the method used. It is generally accepted that broth MIC tests are reproducible to within one doubling dilution of the true end point (i.e. ±1 well or tube in a doubling dilution series).
Broth dilution is a technique in which containers holding identical volumes of broth with antimicrobial agent solutions in incrementally (usually two-fold) increasing concentrations are inoculated with a known number of microorganisms.
Broth micro-dilution denotes the performance of the broth dilution test in micro-dilution trays.
The reference methods described in this document are intended for the testing of pure cultures of yeast fungi. The broth micro-dilution methods described in this document are the same as those described by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)[1][5] and by the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST)[2][10]. These methods were initially shown to provide MICs of fluconazole that were similar, if not identical up to 2 mg/l[3]. Further the methods have been shown to provide MICs for two quality control strains of licensed antifungal agents that are similar as described in this document although quality control results for the spectrophotometer can trend slightly lower than for the visual reading method. The laboratory that wishes to use this document for conducting studies of newer antifungal agents, or as a reference method for comparison to MICs generated by a diagnostic device, can select which of the procedure options to use based upon the choice of MIC reading determined by visual inspection (CLSI method)[5] or by use of a spectrophotometer (EUCAST method)[2][10]. In either case, the procedural details for that option should be followed explicitly. In the first edition of this document, i.e. ISO 16256:2012, the reported quality control tests were performed using broth micro-dilution trays that were not treated in some way by the manufacturers of the plastic trays for either the visual or spectrophotometer method.
In this document the following verbal forms are used:
- “shall” indicates a requirement;
- “should” indicates a recommendation;
- ”may” indicates a permission;
- “can” indicates a possibility or a capability.
WARNING The use of this document can involve hazardous materials, operations and equipment. This document does not purport to address all of the safety problems associated with its use. It is the responsibility of the user of this document to establish appropriate safety and health practices and determine the applicability of regulatory limitations prior to use.