この規格 プレビューページの目次
※一部、英文及び仏文を自動翻訳した日本語訳を使用しています。
F.3 培地および試薬
F.3.1 カゼイントリプトン（HCT）寒天培地の加水分解物
F.3.1.1 ソリューション A
F.3.1.1.1 構成
| MgSO 4 、7H 2 O (CAS No: 10034-99-8) | 12.3g |
| MnSO 4 、H 2 O (CAS N°: 10034-96-5) | 0.169g |
| ZnSO 4 、7H 2 O (CAS番号: 7446-20-0) | 1.44g |
| 水 | 1000ml |
F.3.1.1.2 準備
かき混ぜて成分を水に溶かします。
混合し、0.2 μm フィルターを通してろ過滅菌します。 5ºC ± 3ºC で 6 か月まで保存できます。
F.3.1.2 ソリューション B
F.3.1.2.1 構成
| クエン酸第二鉄アンモニウム (CAS N°: 1185-57-5) | 11.0g |
| 水 | 1000ml |
F.3.1.2.2 準備
かき混ぜて成分を水に溶かします。
0.2 μm フィルターでろ過滅菌します。 5ºC ± 3ºC で 3 か月まで保存できます。光から保護します。
F.3.1.3 ソリューション C
F.3.1.3.1 構成
| CaCl 2 、2H 2 O (CAS No: 10043-52-4) | 14.7g |
| 水 | 1000ml |
F.3.1.3.2 準備
かき混ぜて成分を水に溶かします。
0.2 μm フィルターによる濾過または 121 °C で 15 分間滅菌します。 5ºC ± 3ºC で 6 か月まで保存できます。
F.3.1.4 ソリューション D
F.3.1.4.1 構成
| グルコース (CAS No: 50-99-7) | 20.0g |
| 水 | 適量 100ml |
F.3.1.4.2 準備
かき混ぜて成分を水に溶かします。
0.2 μm フィルターでろ過滅菌します。 5ºC ± 3ºC で 6 か月まで保存できます。
障害が発生した場合は、ソリューションを破棄する必要があります。
F.3.1.5 ベース媒体
F.3.1.5.1 構成
| トリプトン (CAS N°: 91079-40-2) | 5.0g |
| バクトカサミノ酸 (CAS N°: 9000-71-9) | 2.0g |
| KH2PO4 (CAS No: 7778-77-0 ) | 6.8g |
| ソリューション A (F.3.1.1) | 10ml |
| ソリューション B (F.3.1.2) | 2ml |
| ソリューション C (F.3.1.3) | 10ml |
| 寒天 (CAS N°: 9002-18-0) | 12.0g～ a |
| 水 | 1000ml |
| a寒天ゲルの強度によって異なります。 |
F.3.1.5.2 準備
成分と溶液 A, B, C を水にかき混ぜ、沸騰させて溶かします。
滅菌後の完全培地の pH が 25 °C で 7.2 ± 0.2 になるように、必要に応じて pH を調整します。
121 ° C に設定したオートクレーブで 15 分間滅菌します。
F.3.1.6 完全なメディア
F.3.1.6.1 構成
| ベース培地 | 1000ml |
| ソリューション D (F.3.1.4) | 15ml |
F.3.1.6.2 準備
44 °C から 47 °C に冷却したベース培地を溶液 D と無菌的に混合します。
完全培地の 15 ～ 20 ml を滅菌ペトリ皿に注ぎます。固まるまで待ちます。
遮光して、5°C ± 3°C で 1 か月まで保管してください。
完全培地は、250 ml または 500 ml の滅菌ボトルに注ぎ、遮光して最長 3 か月間保存することもできます。
F.3 Culture media and reagents
F.3.1 Hydrolysate of casein tryptone (HCT) agar medium
F.3.1.1 Solution A
F.3.1.1.1 Composition
| MgSO4, 7H2O (CAS N°: 10034-99-8) | 12,3 g |
| MnSO4, H2O (CAS N°: 10034-96-5) | 0,169 g |
| ZnSO4, 7H2O (CAS N°: 7446-20-0) | 1,44 g |
| Water | 1 000 ml |
F.3.1.1.2 Preparation
Dissolve the components in the water by stirring.
Mix and sterilize by filtration through 0,2 μm filter. Store up to six months at 5 °C ± 3 °C.
F.3.1.2 Solution B
F.3.1.2.1 Composition
| Ferric ammonium citrate (CAS N°: 1185-57-5) | 11,0 g |
| Water | 1 000 ml |
F.3.1.2.2 Preparation
Dissolve the component in the water by stirring.
Sterilize by filtration through 0,2 μm filter. Store up to three months at 5 °C ± 3 °C. Protect from light.
F.3.1.3 Solution C
F.3.1.3.1 Composition
| CaCl2, 2H2O (CAS N°: 10043-52-4) | 14,7 g |
| Water | 1 000 ml |
F.3.1.3.2 Preparation
Dissolve the component in the water by stirring.
Sterilize by filtration through 0,2 μm filter or for 15 min at 121 °C. Store up to six months at 5 °C ± 3 °C.
F.3.1.4 Solution D
F.3.1.4.1 Composition
| Glucose (CAS N°: 50-99-7) | 20,0 g |
| Water | qsp 100 ml |
F.3.1.4.2 Preparation
Dissolve the component in the water by stirring.
Sterilize by filtration through 0,2 μm filter. Store up to 6 months at 5 °C ± 3 °C.
Solutions shall be discarded if any precipitate appears.
F.3.1.5 Base medium
F.3.1.5.1 Composition
| Trypton (CAS N°: 91079-40-2) | 5,0 g |
| Bacto casamino Acid (CAS N°: 9000-71-9) | 2,0 g |
| KH2PO4 (CAS N°: 7778-77-0) | 6,8 g |
| Solution A (F.3.1.1) | 10 ml |
| Solution B (F.3.1.2) | 2 ml |
| Solution C (F.3.1.3) | 10 ml |
| Agar-Agar (CAS N°: 9002-18-0) | 12,0 g to 18,0 ga |
| Water | 1 000 ml |
| a Depending on the agar gel strength. |
F.3.1.5.2 Preparation
Dissolve the components and solutions A, B and C in the water by stirring and boiling.
Adjust the pH, if necessary, so that the pH of the complete medium, after sterilization, is 7,2 ± 0,2 at 25 °C.
Sterilize for 15 min in an autoclave set at 121 °C.
F.3.1.6 Complete medium
F.3.1.6.1 Composition
| Base medium | 1 000 ml |
| Solution D (F.3.1.4) | 15 ml |
F.3.1.6.2 Preparation
Aseptically mix the base medium, cooled at 44 °C to 47 °C, with the solution D.
Pour 15 ml to 20 ml portions of the complete medium into sterile Petri dishes. Allow it to solidify.
Store up to one month at 5 °C ± 3 °C, protect from light.
The complete medium can also be poured in 250 ml or 500 ml sterile bottles and stored up to three months, protected from light.